Détail des nouvelles
Domicile » Nouvelles » 隐藏 » Optimisation de machines PCR en temps réel pratiques

Optimisation de machines PCR en temps réel pratiques

Nombre Parcourir:0     auteur:Éditeur du site     publier Temps: 2021-11-24      origine:Propulsé

enquête

facebook sharing button
twitter sharing button
line sharing button
wechat sharing button
linkedin sharing button
pinterest sharing button
whatsapp sharing button
sharethis sharing button
Optimisation de machines PCR en temps réel pratiques

S’il s’agit d’une PCR quantitative par fluorescence en temps réel pour la quantification des virus et le génotypage des SNP, nous avons besoin d’un appareil de PCR avec la spécificité la plus élevée possible ;s'il s'agit d'une détection d'agents pathogènes et d'ARNm, nous avons besoin d'une sensibilité élevée Appareil PCR, alors comment optimiser cette machine PCR ?

Voici la liste du contenu :

l Améliorer l'efficacité de l'amplification des machines PCR

l Utilisation d'amorces de machine PCR en temps réel pour la PCR générale

Améliorer l’efficacité de l’amplification des machines PCR

Améliorer la machine PCR l'efficacité, la spécificité et la sensibilité de l'amplification, nous pouvons optimiser la machine de PCR quantitative de fluorescence en temps réel pour l'expérience grâce à une série de mesures.La première est la sélection de la séquence cible.

1, le choix d'une séquence cible de machine PCR en temps réel pratique, longueur appropriée entre 50 et 150 pb.Les séquences plus courtes prennent moins de temps à synthétiser et ont des temps d'amplification plus courts, ce qui réduit le risque de contamination de l'ADN amplifié.

2, lors de la sélection de la séquence cible, utilisez la recherche BLAST pour analyser la séquence cible à la recherche de polymorphismes et d'erreurs de séquençage et les éviter.S'il y a des séquences en double dans la séquence cible, cela réduira la sensibilité de détection de cet appareil PCR et doit également être évité.

3, contrôlez le contenu GC ≤ 60 % dans la séquence cible.Une teneur élevée en GC affectera la dénaturation de la séquence cible dans le cycle thermique, mais il sera également facile de produire une amplification non spécifique de cette machine PCR.

4, évitez de générer une structure secondaire.Les séquences cibles avec des séquences répétitives inverses sont faciles à produire une structure secondaire, ce qui affecte l'hybridation d'amorces et de sondes pratiques de machine PCR en temps réel.

En plus de cela, nous devons également nous assurer que la qualité du modèle n’affectera pas l’amplification et que les résultats de la machine PCR en temps réel pratique sont fiables.Par exemple, l’ADN endommagé ne peut pas être amplifié de manière adéquate dans la machine PCR, voire pas du tout.En outre, la présence de réactifs inhibiteurs de l'ADN polymérase (DMSO, etc.) et de contaminants (SDS, etc.) dans la matrice peut affecter la fiabilité des résultats d'amplification de la machine PCR.

Utilisation d'amorces de machine PCR en temps réel pour la PCR générale

Bénéficiez d'un accès pratique en temps réel Appareil PCR amorces, cette méthode peut également être utilisée pour la PCR ordinaire.

1, la longueur doit être de 18 à 30 pb pour garantir la spécificité de la liaison.

2, La température de fusion (valeur Tm) doit être de 55 à 60 °C et les valeurs Tm des deux amorces doivent différer de 2 à 3 °C.

3, chaque amorce doit avoir 1 à 3 guanines ou cytosines à l'extrémité 3', ce qui peut facilement réduire l'amplification non spécifique pendant la machine PCR en temps réel.Plus de 3 se retourneront contre vous et provoqueront un « effet de glissement » menant à la mauvaise extension.

4. La teneur en GC des amorces doit être d'environ 50 %, une teneur en GC trop élevée augmentera la valeur Tm.

5, les amorces de la machine PCR doivent éviter les séquences répétitives inverses, car elles formeront une structure secondaire, affectant la liaison de l'amorce sur la matrice.

6. S'il s'agit d'une RT-PCR, vous devez également éviter de concevoir des amorces pour se lier à des séquences d'exons, ce qui entraînerait des résultats expérimentaux faussement positifs sur la machine PCR.L'approche correcte doit être conçue sur le flanc de l'intron long, ou sur les introns courts, ou à travers la région de jonction exon-exon.

7. Dessalage et purification des amorces.

Notez que parfois, lorsque vous avez effectué tous les points, les amorces peuvent ne pas s'amplifier, vous devez donc reconcevoir les amorces.

En se concentrant sur la détection rapide des acides nucléiques et la détection rapide POCT, Bioteke propose des types d'instruments de laboratoire tels que : prélèvement d'échantillons de virus, extracteur automatique d'acides nucléiques, machine PCR et appareil de désinfection.Et il fournit également de nombreux types de réactifs et de kits.

LIENS RAPIDES
CENTRE DE PRODUITS
NOUS CONTACTER
Image d'espace réservé

Téléphone: 008651068501244

Image de balise

E-mail : zr@bioteke.cn

droits d'auteur Bioteke Corporation (Wuxi) Co., Ltd | 苏 ICP 18042459 号 -1