Nombre Parcourir:0 auteur:Éditeur du site publier Temps: 2021-11-20 origine:Propulsé
Quand Appareils PCR détecter les facteurs de micro-infection, ils sont sujets à divers problèmes dus à la contamination.Par conséquent, lors de l’utilisation des machines PCR, les opérateurs doivent suivre strictement certaines procédures opérationnelles afin de minimiser une éventuelle contamination par PCR ou d’éliminer l’apparition de contamination et d’autres problèmes.Ce qui suit décrira l’utilisation des machines PCR et les précautions à prendre.
Voici la liste du contenu :
l Instructions pour le fonctionnement de la machine PCR.
l Notes sur l'utilisation des machines PCR.
l Méthodes d’entretien et de maintenance des instruments PCR.
1. Amorces : déterminer la spécificité de Appareil PCR amplification.Différentes amorces sont utilisées en fonction du test ADN, et chaque micro-organisme pathogène possède ses propres amorces spécifiques.
2. ADN polymérase résistante à la chaleur : Cette enzyme est isolée des bactéries résistantes à la chaleur et peut résister à des températures élevées de 90°C à 100°C.
3. Tampon de machine 10×PCR : 500 mmol/l de KCl ;100 mmol/L Tris-HCl (pH8,4,20℃) 150 mmol/L MgCl2,1 mg/ml de gélatine.Un tampon 10 × PCR a été acheté avec l'enzyme.
Solution mère pour machine PCR dNTP 4,5 mmol/L : Combinez 100 mg chacun de sels de sodium dATP, dCTP, dGTP et dTTP, ajoutez de l'eau désionisée stérilisée pour dissoudre, ajustez le pH à neutre avec NaOH, distribuez 300 μl chacun et conservez à -20 ℃ .La concentration de dNTP est déterminée par la méthode d'absorption UV.Les solutions dNTP disponibles actuellement sont des produits commercialisés.
5. Matrice ADN : L'échantillon à tester est traité avec une solution de traitement.Les différents traitements et opérations varient, mais le but est d'exposer l'ADN testé dans l'échantillon de la machine PCR.
1. La machine PCR doit être placée sur une plate-forme horizontale et robuste avec une tension adaptée au système d'alimentation externe et un bon fil de terre est requis.
2. La température ambiante est maintenue à environ 23 ℃ et l'humidité est maintenue à environ 60 %.
3. La machine PCR doit être équipée d'un régulateur de tension de puissance ≥ 3000 W.
4. Il doit être nettoyé et entretenu régulièrement.
5. Lors de l’utilisation de l’appareil PCR, les étapes d’utilisation ci-dessus doivent être strictement respectées.
1. Nettoyage de la cuvette, ouvrez d'abord le couvercle de la machine PCR, puis trempez la cuvette avec 95 % d'éthanol ou 10 % de solution de nettoyage pendant 5 min, puis nettoyez les puits contaminés ;aspirer le liquide avec une micropipette et utiliser un coton-tige pour absorber le liquide restant ;allumez la machine PCR, réglez le programme PCR pour maintenir la température à 50°C et faites-le fonctionner, et laissez le liquide résiduel s'évaporer et éliminer.Habituellement, 5 à 10 minutes suffisent.
2. Nettoyage du couvercle chaud pour la machine PCR quantitative fluorescente, lorsqu'il y a une contamination fluorescente et que cette contamination ne provient pas de la cuvette, ou lorsqu'il y a une contamination ou des résidus affectent le couvercle chaud de la machine PCR en vrac, vous devez utiliser de l'air comprimé ou Eau pure pour nettoyer le fond du couvercle du tampon, afin de garantir que le trou de la cuvette est propre, aucune saleté ne bloque le chemin optique.
3. Nettoyage de la surface externe de l'instrument PCR Le nettoyage de la surface externe de l'instrument peut éliminer la poussière et la graisse, mais pas jusqu'à l'effet de la désinfection.Choisissez un agent de nettoyage non corrosif pour nettoyer la surface externe de la machine PCR.
4. Remplacez le fusible, éteignez d'abord la machine PCR, débranchez-la, ouvrez la boîte à fusibles à côté de la prise d'alimentation, remplacez-la par un fusible de rechange et observez si elle revient à la normale.
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