Introduction aux machines PCR

Appareil PCR, également connu sous le nom d'instrument d'amplification génique PCR, instrument d'amplification PCR, instrument d'amplification d'acide nucléique par réaction en chaîne par polymérase, est un instrument qui amplifie l'ADN spécifique à l'aide de la technologie PCR (réaction en chaîne par polymérase).La machine PCR est largement utilisée dans les laboratoires médicaux et biologiques, par exemple pour déterminer si un organisme de test présentera un profil de maladie génétique, pour diagnostiquer une maladie infectieuse. maladies, pour répliquer des gènes et identifier la filiation.Qu'est-ce qu'un appareil PCR ?

Voici la liste du contenu :

l La structure de base d'une machine PCR

lPrincipe de fonctionnement de la machine PCR

l Cinétique de réaction des machines PCR

La structure de base d'une machine PCR

Une machine PCR se compose généralement d'une partie couvercle chaud, d'une partie cycle thermique, d'une partie transmission, d'une partie contrôle et d'une partie alimentation, etc.

Principe de fonctionnement de la machine PCR

Le principe de fonctionnement du Appareil PCR est similaire au processus de réplication naturel de l'ADN, dont la spécificité dépend d'amorces oligonucléotidiques complémentaires aux deux extrémités de la séquence cible, et comprend trois étapes réactionnelles de base : dénaturation-annelage-extension.

1. Dénaturation de l’ADN matrice

L'ADN matrice est chauffé à environ 93 °C pendant un certain temps pour dissocier l'ADN matrice double brin ou l'ADN double brin formé par une machine PCR afin de le rendre simple brin afin qu'il puisse se lier aux amorces en préparation pour la prochaine vague de réactions.

2. Annealing (dénaturation) de l’ADN matrice et des amorces

Une fois que l'ADN matrice est dénaturé en simple brin par chauffage, la température est abaissée à environ 55 °C et les amorces sont appariées et liées à la séquence complémentaire simple brin de l'ADN matrice.

3. Extension des amorces

Le conjugué matrice d'ADN-amorce est synthétisé sous l'action de la TaqDNA polymérase, en utilisant le dNTP comme matériau réactionnel et la séquence cible comme matrice, pour synthétiser un nouveau brin répliqué semi-conservé complémentaire du brin d'ADN matrice selon le principe de base. -appariement et réplication semi-conservée.

En répétant le processus de dénaturation-recuit-extension, davantage de « chaînes répliquées semi-conservées » peuvent être obtenues, et ces nouvelles chaînes peuvent être utilisées comme modèles pour le cycle suivant.

La machine PCR prend 2 à 4 minutes pour terminer chaque cycle, et ainsi de suite à plusieurs reprises, l'ADN produit dans chaque cycle peut devenir la matrice du cycle suivant, et chaque cycle amplifie de 1 le nombre de copies de la région spécifique de l'ADN entre deux amorces synthétiques. -fold, et le produit de la machine PCR s'amplifie rapidement sous la forme exponentielle de 2. Après 25 à 30 cycles (2 à 3 heures), la machine à PCR peut théoriquement amplifier le gène plus de 109 fois après 25 à 30 cycles (2 à 3 heures). 3 heures), et en pratique, il peut généralement atteindre 106 à 107 fois.

Cinétique de réaction de la machine PCR

Les trois étapes de réaction du Appareil PCR sont répétés, entraînant une augmentation exponentielle de la quantité d’amplification de l’ADN.L'amplification finale de l'ADN de la réaction peut être calculée en utilisant y = (1+X) n.Y représente le nombre de copies du fragment d'ADN amplifié, X représente l'efficacité moyenne d'amplification par amplification et n représente le nombre de cycles.La valeur théorique de l'efficacité moyenne de l'amplification est de 100 %, mais au début de la réaction réelle, l'augmentation du fragment d'ADN de la séquence cible est exponentielle et avec l'accumulation progressive des produits de la machine PCR, le fragment d'ADN amplifié n'augmente plus. exponentiellement, mais entre dans la période de croissance linéaire ou la période stationnaire, c'est-à-dire « l'effet de stagnation », de sorte que l'efficacité moyenne de la machine PCR atteint l'efficacité moyenne de la machine PCR n'atteint pas la valeur théorique.

Bioteke Corporation, qui se concentre sur le diagnostic moléculaire et la détection rapide, en particulier sur l'extraction d'acide nucléique, est un fabricant professionnel de haute technologie et de machines PCR.Il se déroule dans la ville de Wuxi, dans la province du Jiangsu, en Chine.Nous sommes donc impatients de coopérer avec vous.